血细胞的生成是多能造血干细胞（hematopoieticstemcells，HSCs）在特定造血微环境的网络调控下，增殖分化成各种成熟血细胞的动态平衡过程。人类HSCs主要存在于骨髓内，外周血中也含有少量的HSCs。HSCs具有高度自我更新和增殖的能力，可以分化成各种血细胞的前体细胞（如造血祖细胞），然后在造血微环境的作用下再定向增殖分化成为各种原始和成熟血细胞，最后，这些成熟的血细胞由骨髓进入血液，完成造血[1]。由于骨髓HSCs分化程度低，增殖活性高，对化疗药物、辐射等因素敏感，因而，化疗药物、辐射易损伤HSCs、造血祖细胞和骨髓造血微环境，引起骨髓抑制[2-3]。多种原因引起的骨髓造血功能抑制与HSCs密切相关，HSCs衰老导致的功能抑制是引起造血功能障碍的主要原因。因此，深入研究HSCs衰老的机制对防治造血功能低下相关疾病有重要的科学意义，改善HSCs衰老为造血功能低下防治的重要策略。
*芪和当归的配伍应用最有名的是由李东垣所创的*芪、当归配比为5∶1的当归补血汤，由*芪一两、当归二钱组成，主治气虚发热之证。现代以当归补血汤治疗多种贫血和造血功能低下有较好疗效。以往研究表明，*芪和当归配伍可增加骨髓有核细胞数和血中造血生长因子（HGF）水平，抑制HSCs衰老和促进其增殖[4-5]，升高外周血像[6-7]，其中以*芪和当归1∶1配伍的促造血作用最强。进一步以HSCs衰老模型研究发现，*芪-当归1∶1配伍可促进衰老HSCs增殖，促进细胞周期转换[8]。唐蓉等[9]研究表明，*芪-当归1∶1配伍时由小肠吸收的主要成分是阿魏酸、毛蕊异*酮、毛蕊异*酮苷、*芪甲苷和芒柄花素5种活性成分。由于中药多是通过口服给药吸收后进入体内发挥作用，因此，推测此5种活性成分可能为其促造血作用的主要药效物质。但是，这5种成分配伍能否发挥*芪、当归配伍时的功效，其促造血的作用机制是什么，这些问题尚未阐明。本实验采用HSCs衰老模型，研究*芪和当归的主要活性成分配伍对衰老HSCs增殖的影响，以明确其促造血作用的主要药效物质，为其合理应用提供科学依据。
1材料
1.1实验动物
C57BL/6小鼠，6～8周龄，雄性，体质量20～25g，动物质量合格证号SCXK（湘）-；清洁级SD雄性大鼠，体质量～g，动物质量合格证号SYXK（湘）-；动物均由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，实验场地湖南中医药大学动物实验中心［场地许可证号SYXK（湘）-］。
1.2主要试剂
优级胎牛血清（批号P30-）、IMDM培养液（批号），美国Hyclone公司；二甲亚砜（DMSO，批号ST）、三丁基过氧化氢（T-BHP，批号STBDV，用时以含0.1%DMSO-IMDM培养液溶解）、青链霉素混合液（批号SV），美国Sigma公司；β-半乳糖苷酶（β-Gal）染色试剂盒（碧云天生物有限公司，批号CO）；细胞增殖及细胞*性检测（CCK-8法）试剂盒（武汉博士德生物有限公司，批号AR-）；Anti-Sca-1-PE（批号--）、Anti-PEMicroBeads（批号--）、MS分选柱（批号--），德国Miltenyi公司；磷酸盐缓冲液（PBS，吉诺生物医药技术有限公司，批号GNM）；牛血清白蛋白（BSA，批号WB02）、乙二胺四乙酸（EDTA，批号WB04），长沙维尔生物科技有限公司；Ficoll淋巴细胞分离液（天津灏洋华科生物科技有限公司，批号TBDLR）；大鼠抗小鼠β-actin单克隆抗体（批号-1-Ig）、兔抗小鼠细胞周期蛋白D1（CyclinD1）单克隆抗体（批号04-）、兔抗小鼠细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）单克隆抗体（批号ab）、辣根过氧化物酶（HRP）标记羊抗兔二抗（批号ab）、HRP标记羊抗鼠二抗（批号ab），Ab